上海赛默科技生物发展有限公司
网站首页  |  公司介绍  |  公司新闻  |  产品展示  |  资料下载  |  技术文章  |  资质认证  |  信息反馈  |  人才招聘  |  联系我们
产品搜索
产品目录
酶标仪
洗板机
高压灭菌器/高压灭菌锅
PCR仪/基因扩增仪
旋转蒸发仪
离心机
紫外分光光度计
半自动生化分析仪
生化培养箱
听力计/听力测试
人ELISA试剂盒
动物ELISA试剂盒
酶联免疫(ELISA)试剂盒
细胞株
日本东京理化
电泳槽
纯水机
生物耗材
孵化器
美国奥立龙
美国尤尼柯
美国福禄克
英国德鲁克
美国必能信BRANSON
赛默飞世尔
日本 奥林巴斯 OLYMPUS 显微镜
海尔
点击量多的产品
·
较早技术文章
· 酶标仪酶标仪的正确使用方法
· 高压灭菌锅的常见操作错误分析
· 高压灭菌锅的几种常见故障解决办法
· 高压蒸汽灭菌器原理
· 磁力搅拌器的转子如何正确选择
· 酶标仪的使用范围及注意点
  技术文章 首页 >> 技术文章 >> 进口PCR仪的常见问题详细解答
进口PCR仪的常见问题详细解答
点击次数:1137 发布时间:2015-02-27
   1. 进口PCR仪cDNA产量的很低
  可能的原因:
  *RNA模板质量低
  *对mRNA浓度估计过高
  *反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足
  *同位素磷32过期
  *反应体积过大,不应超过50μl
  2. 进口PCR仪扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅
  *zui常见的原因在于您的反应体系是进口PCR仪的反应体系而不是RT-进口PCR仪的反应体系
  *与反应起始时RNA的总量及纯度有关
  *建议在试验中加入对照RNA
  **链的反应产物在进行进口PCR仪扩增时,在总的反应体系中的含量不要超过1/10
  *建议用Oligo(dT)或随机引物代替基因特异性引物(GSP)用于*链合成。由于RNA模板存在二级结构,如环状结果,有可能导致GSP无法与模板退火;或SSⅡ反转录酶无法从此引物进行有效延伸。
  *目的mRNA中含有强的转录中止位点,可以试用以下方法解决:
  a. 将*链的反应温度提高至50℃。
  b. 使用随机六聚体代替Oligo(dT)进行*链反应。
  3. 产生非特异性条带
  *用RT阴性对照检测是否被基因组DNA污染。如果RT阴性对照的进口PCR仪结果也显示同样条带,则需要用DNase I重新处理样品。
  *在进口PCR仪反应中,非特异的起始扩增将导致产生非特异性结果。在低于引物Tm 2至5℃的温度下进行退火,降低镁离子或是目的DNA的量将减少非特异性结果的产生。
  *由于mRNA剪切方式的不同,根据选择引物的不同将导致产生不同的RT-进口PCR仪结果。
  4. 产生弥散(smear)条带
  *在进口PCR仪反应体系中*链产物的含量过高
  *减少引物的用量
  *优化进口PCR仪反应条件/减少进口PCR仪的循环次数
  *在用DNase处理被DNA污染的RNA样品时,其产生的寡核苷酸片段会产生非特异性扩增,一般会显示为弥散背景。
  5. 进口PCR仪产生大分子量的弥散条带
  *大多数情况下是由于退火温度过低而导致的非特异性的起始及延伸产生的
  *对于长片段的进口PCR仪,建议将反应体系中cDNA的浓度稀释至1:10(或1:100-1:200)
  6. 在无反转录酶的情况下,对照RNA获得扩增结果
  *通常是由于对照RNA中含有痕量DNA而导致的。由于进行体外转录时不可能将所有的DNA模板消除。建议可将*链cDNA稀释1:10、1:100、1:1000倍以消除DNA污染所造成的影响。
  *有可能是引物二聚体的条带
  7. 进口PCR仪扩增产物滞留在加样孔中
  *有可能是由于模板量过高而导致进口PCR仪结果产生了高分子量的DNA胶状物。建议将*链结果至少稀释100倍再进行二次扩增。
  *另外,在二次进口PCR仪时使用的退火温度如果比引物的Tm值低5℃,可以将退火温度适当增高或进行热启动以提高特异性。
  8. SSⅢ与SSⅡ有何不同?
  *具有更高的热稳定性(达50℃)
  *具有更长的半衰期(达220分钟)
  *对进口PCR仪无抑制
  *干冰运输
  *Tdt活性更低
  9. 为什么有人更喜欢用SSⅢ而不是ThermoScript?
  ThermoScript如果保存不当会引起活性很快降低,SSⅢ则更稳定。
  10. 为什么使用基因特异性引物(GSP)?
  GSP在扩增低丰度的转录本时是的。OligodT引物建议用于高质量RNA及全长转录本的逆转录;随机引物用于mRNA片段的逆转录。
  11. 进口PCR仪什么情况下需要使用RNase H?
  在*轮进口PCR仪中RNA/DNA杂合体不能正常变性时
上一章:多功能酶标仪之语言界面 下一章:多功能酶标仪的维护方法分析
推荐产品
·MK3酶标仪维修
最新产品
·MLS-830L高压灭菌器
·MLS-530L高压灭菌器
·MK3酶标仪维修
·11-10NanoDrop One/Onec 紫外分光光度计
·松下高压灭菌锅松下高压灭菌锅
·松下高压灭菌器松下高压灭菌器
·MLS-3981L-PC三洋MLS-3981L-PC高压灭菌锅
·MLS-3981L-PC三洋MLS-3981L-PC高压灭菌器
较早新闻
·洗板机有哪些作用?
·酶标仪在微生物学的应用
·酶标仪和普通的光电比色计的差异介绍
·酶标仪在钙离子通道检测方面的应用
·三洋高压灭菌锅有着较高的性价比
·酶标仪已经逐步进入自动化时代
行业新闻
·如何正确给酶标仪维修
·新手常见的雷杜酶标仪使用问题分析
·半自动生化分析仪为何广泛应用于临床?
·伯乐酶标仪如此设计,其性能可想而知有多优异
·掌握这七点,生化培养箱的安装调试变得十分简单
·原来这才是生化分析仪常见故障的正确解决方法!
热门搜索:PCR仪厂家,高压灭菌锅厂家,宝特酶标仪,宝特洗板机
上海赛默生物科技发展有限公司(www.919117.com) 版权所有 总访问量:276469 地址:上海市浦东区中信五牛城C座36 邮编:
电话:- 传真:- 手机:13621940559 联系人:徐经理
邮箱:13621940559@163.com  GoogleSitemap 技术支持:化工仪器网 管理登陆 ICP备案号:
联系人:徐经理
联系电话:
021-65481313
手机:
13681743029
(微信同手机号)