基本的PCR须具备
1.要被复制的DNA模板 Template
2.界定复制范围两端的引物Primers.
3.DNA聚合酶Taq. Polymearse
4.合成的原料(四种脱氧核苷酸)及水。
PCR仪工作原理
利用升温使DNA变性,在聚合酶的作用下使单链复制成双链,进而达到基因复制的目的。
PCR的反应包括三个主要步骤
1. Denaturation
2. Annealing of primers,
3. Extension of primers。
所谓 Denaturing乃是将DNA加热(至90~95℃)变性, 将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板. 而Annealing 则是令 Primers于一定的温度下(冷却至55~60℃)附着于模板DNA两端。 zui后在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下(加热至70~75℃)进行引物的延长 Extension of primers及另一股的合成。
PCR的zui早设想核酸研究已有100多年的历史,本世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术,Korana于1971年zui早提出核酸体外扩增的设想:“经过DNA变性,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。
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