高压灭菌锅的灭菌工作原理：
湿热灭菌是物品放入密闭的加压灭菌锅内加热，产生蒸汽，排除冷空气后密闭，使蒸汽不溢出，增大压强，使水的沸点升高，高于100℃，导致菌体蛋白质凝固变性达到目的 ,湿热灭菌zui主要的设备就是高压灭菌锅。
常用高压灭菌锅主要有手提式高压灭菌锅、台式高压灭菌锅、立式高压灭菌锅等几种，种类不同，但使用基本相似，具体操作如下：
1、使用前应了解并掌握高压灭菌锅的原理及操作规则，以及不正确使用导致灾难性后果，保障消毒灭菌的质量，使用人员需经过有关培训。
2、所有具有传染性的废物都应该高压灭菌。
3、 开始灭菌前所有物品必须贴有灭菌指示带，废物灭菌后可以看到灭菌是否*。
4、高压灭菌锅操作人员在使用高压灭菌锅时不得离开岗位，高压灭菌锅应按照规定进行安全和计量检定，检定合格方可投入使用，并应注意日常维护保养。
5、高压灭菌锅内的物品不得放的过满，否则影响灭菌效果。放好被消毒灭菌的物质后，高压灭菌锅的盖子或门尽量拧紧。
6实验室高压灭菌锅由三级生物安全防护实验室管理员定期检查，以确保高压灭菌锅正常工作，防止意外事故发生，保证消毒灭菌效果。
高压灭菌锅使物品灭菌后达到无菌要求，这是药品实验中的一个基本保证。高压灭菌锅灭菌效果是否合格是实验成败的zui基础zui关键的首要步骤。本文提供了进行灭菌效果验证的一个简易的方法。
1 试验材料
嗜热芽孢杆菌纸片；噬热芽孢杆菌ATCC7053，含芽孢量5—105CFU片]121 oC压力蒸汽灭菌化学指示卡；溴甲酚紫胨水培养基，116~C20分钟高压灭菌后备用。0—150 oC留点温度计
2 方法与结果
将嗜热芽孢杆菌纸片用无菌镊子放人密封试管中。化学指示卡和留点温度计放人敞口的试管中。上两种试管各准备5—10份。分别放置在高压灭菌锅蒸汽口处、底部排气口处及底部水口处或上下左右中间5处。如灭菌器为二层，则需放10处】。留点温度计标化合格后可用于验证试验。检测前，需将温度计的水银柱甩至40℃以下。每次监测后留点温度计的温差应在1oC之间，则说明灭菌器内的温度分布是均匀的。灭菌后的菌片应在严格无菌操作条件下放人灭菌后的溴甲酚紫胨水培养基内。56—60~C培养2448小时，观察颜色变化。如培养基变为黄色，说明菌片中的嗜热芽孢杆菌尚未*灭活，细菌仍可在培养基中生长，分解葡萄糖产酸变为黄色。如培养基颜色不变化仍为紫色，则说明芽孢菌已灭活。同时要用未经灭菌的纸片放人培养基内作为阳性对照，不加纸片的空白培养基作为阴性对照。化学指示卡上的指示色块，在高压蒸汽灭菌时，由淡黄色变为黑色。随着颜色变化的深浅，并与对照色相比，可判断灭菌效果是否达到要求。化学指示卡应在干燥处保存。遇潮会变色，影响灭菌效果的观测。高压蒸汽灭菌必须使蒸汽顺利进入灭菌器内，与灭菌物品接触，并将原有的冷空气排出方可达到灭菌的效果。要进行空载热分布和满载热穿透力验证(满载时不超过总体积的2／3)。二种验证各重复三次，共做六次见表。5个点六次试验表明温度均在121 oC，化学指示卡变黑；程度与对照色一致；培养基均未改变颜色，说明高压蒸汽灭菌效果合格。
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