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  技术文章 首页 >> 技术文章 >> PCR仪反应液污染处理方法
PCR仪反应液污染处理方法
点击次数:980 发布时间:2016-05-25
  PCR仪是一种利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内InVitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。因而,在PCR仪使用时对于环境要求很高,为了避免实验未完成前可能出现的任何污染反应液的情况,应该了解关于反应液受到污染时,反应液处理方法:
  l  紫外照射法:未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液进行紫外照射,注意事项与方法同上述UV照射法;
  l  内切酶法:选择识别4个碱基的内切酶(如Msp I和Taq I等),可同时选择几种,以克服用一种酶只能识别特定序列的缺陷,室温作用1h 后加热灭活进行PCR;
  l  DNase I法:PCR混合液(未加模板和Taq聚合酶)加入0.5U DNase I,室温反应30 min后加热灭活,然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增。该方法的优点是不需要知道污染DNA的序列;
  l  g射线辐射法:1.5kGy的辐射可完全破坏0.1ng基因组DNA,2.0 kGy可破坏104拷贝的质粒分子,4.0 kGy仍不影响PCR,但高于此限度会使PCR扩增效率下降。引物可受照射而不影响PCR,g射线是通过水的离子化产生自由基来破坏DNA的。
  PCR仪的使用要求很高,因此不允许在实验过程中出现一丝错误,尤其是任何与实验有关的物品的污染情况。上述关于PCR仪反应液污染情况的及时处理方法一定能帮助您在实验中出现类似情况时及时处理。
上一章:酶标仪的诊断方式有哪些? 下一章:全自动生化分析仪常见问题
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