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酶标仪在钙离子通道检测方面的应用

发布时间:2017-03-10      点击次数:3634
   酶标仪是一种精密的光学仪器,因此良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性,还能够延长其使用寿命。根据DINVDE0871条例,仪器应放置在无磁场和干扰电压的位置。依据DIN45635-19条例:   仪器应放置在低于40分贝的环境下。   为延缓光学部件的老化,应避免阳光直射。   操作时环境温度应在15℃-40℃之间,环境湿度在15%-85%之间。   操作电压应保持稳定。   操作环境空气清洁,避免水汽,烟尘。   保持干燥、干净、水平的工作台面,以及足够的操作空间。
  酶标仪用于检测钙离子通路主要通过两种方式:1,荧光法。化合物与细胞膜上离子通道结合后,改变离子通道状态,通道打开,钙离子进入细胞。进入细胞后与细胞内钙离子荧光指示剂结合,发出荧光后酶标仪捕获,荧光强度与进入细胞的钙离子含量成正比。荧光指示剂多用FLuo3,Fluo3-AM是一种可以乙酰甲酯衍生物,可以穿透细胞膜进入细胞,进入细胞后被细胞内的酯酶剪切成FLuo3并滞留在细胞内,钙离子进入细胞后与之结合,会发出较强的荧光。2,发光法。水母发光蛋白复合物(Aequorin)由22kDa的水母蛋白(Apoaequorin protein)、分子氧和底物腔肠素组成。只有当钙离子(Ca2+)与该复合物结合后,腔肠素才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide,同时释放出CO2和蓝色荧光(~466 nm)。正是此Ca2+依赖性的反应过程(见图1),使得腔肠素非常适用于监测活细胞内钙离子水平。与常规的荧光钙离子指示剂相比,其主要具有以下几个优点,1)能检测较大范围的钙浓度 – 从0.1 μM至 >100μM;2)样品无自体荧光,背景荧光低于使用荧光钙离子指示剂;虽然信号比使用荧光钙离子指示剂弱,但是通过成像仪器可以得到更高的信噪比,因此具有更高的灵敏度。3)水母发光蛋白复合体能够稳定维持在细胞内,使其能够进行数小时至数天的钙离子监测。

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