ELISA试剂盒的温育常选用的温度有43℃、37℃、室温文4℃等。37℃是试验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的适宜温度。在树立ELISA方法作反响动力学研究时，试验标明，两次抗原抗体反响一般在37℃经1～2小时，产品的生成可达高峰。为加快反响，可进步反响的温度，有些试验在43℃进行，但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为*，在放射免疫测定中多使反响在冰箱中过夜，以构成较多的沉淀。但因所需时刻太长，在ELISA试剂盒中一般不予选用。
ELISA试剂盒的保温方法除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均选用水浴，可将ELISA试剂盒板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度敏捷平衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此刻可让反响板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA试剂盒应放在湿盒内，湿盒要选用传热性杰出的资料如金属等，在盒底垫湿的纱布，然后将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规则的温度，特别是在气温较低的时候更应如此。无论是水浴仍是湿盒温育，反响板均不宜叠放，以确保各板的温度都能敏捷平衡。室温温育的反响，操作时的室温应严格约束在规则的范围内，规范室温温度是指20～25℃，但具体操作时可根据说明书的要求操控温育。室温温育时，ELISA试剂盒只需平置于操作台上即可。应留意温育的温度和时刻应按规则力求。为确保这一点，一个人操作时，一次不宜多于两块板一起测定。
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