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黄曲霉 (AFT)ELISA试剂盒

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产品型号:
AFT
产品报价:
产品特点:
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  AFT黄曲霉 (AFT)ELISA试剂盒的详细资料:

黄曲霉(AFT)ELISA检测试剂盒

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被 黄曲霉(AFT)捕获抗原的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的 黄曲霉(AFT)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

1.  血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

  1. 酶标仪(450nm
  2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL
  3. 37恒温箱

操作注意事项

  1.   试剂盒保存在2-8,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
  2.   实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
  3.   预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。
  4.   严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
  5.   所有液体组分使用前充分摇匀。

 

试剂的准备

 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按120稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法

  1.   手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
  2.   自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步骤

  1.   从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4
  2.   设置标准品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加;标准品孔各加不同浓度的标准品50μL
  3.   待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL
  4.   随后标准品孔和样本孔中(空白孔不加)加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体50μL,,用封板膜封住反应孔,37水浴锅或恒温箱温育60min
  5.   弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  6.   所有孔加入底物AB50μL37避光孵育15min
  7.   所有孔加入终止液50μL15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

试剂盒性能

1.  准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900

2.  灵敏度:zui低检测浓度小于1.0 ng/mL

3.  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性:板内、板间变异系数均小于15%

5.  贮藏:2-8,避光防潮保存。

6.  检测范围:6.25 ng/ml -200ng/ml

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