T淋巴细胞亚群CD14 ELISA 试剂盒

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T淋巴细胞亚群CD14 ELISA 试剂盒

基本原理

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①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。

ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：

①固相的抗原或抗体

②酶标记的抗原或抗体

③酶作用的底物（显色剂）。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。

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间接法

间接法常用于检测抗体，一般的操作步骤为：

1. 将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原。

2. 加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。

3. 洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗体，与待测的一次抗体键结。

4. 洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酶呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。