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软骨寡聚基质蛋白(COMP)ELISA 试剂盒

简要描述:软骨寡聚基质蛋白(COMP)ELISA 试剂盒 cartilage oligomeric matrix protein!本公司长期经营代理试剂盒,价格实惠,质量保证,价格请咨询在线人员。

  • 产品型号:COMP
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2018-07-05
  • 访  问  量:292

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软骨寡聚基质蛋白(COMP)ELISA 试剂盒

酶与抗体交联,常用戊二醛法和过碘酸盐氧化法。郭春祥建立的HRP标记抗体的改良过碘酸钠法简单易行,标记效果好,特别适用于实验室的小批量制备。其标记程序为:将5μg HRP溶于0.5ml蒸馏水中,加入新鲜配制的0.06 mol/L的过碘酸钠(NaIO4)水溶液0.5ml,混匀置4℃冰箱30分钟 , 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml,室温放置30分钟后加入含5(g纯化抗体的水溶液1ml,混匀并装透析袋,以0.05mol/L、pH9.5的碳酸盐缓冲液于4℃冰箱中慢慢搅拌透析6小时(或过夜)使之结合,然后吸出,加硼氢化钠(NaBH4)溶液( 5(g/ml)0.2ml,置4℃冰箱2小时,将上述结合物混合液加入等体积饱和硫酸铵溶液,置4℃冰箱30分钟后离心,将所得沉淀物溶于少许0.02mol/L、pH7.4PBS中,并对之透析过夜(4℃),次日离心除去不溶物,即得到酶标抗体,用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml,进行测定后,冷冻干燥或低温保存。

软骨寡聚基质蛋白(COMP)ELISA 试剂盒

竞争法

  1. 竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制,一般用于检测小分子抗原,其操作步骤为:

  2. 将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体

  3. 加入待测检体,使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结

操作程序

1.   分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入标准品50μl;在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。轻轻晃动混匀,37℃温育60分钟。

2.   弃去液体,甩干,每孔加满稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

3.   每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

4.   取出酶标板,每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

需要而未提供的试剂和器材

1.   37℃恒温箱。

2.   标准规格酶标仪。

3.   精密移液器及一次性吸头

4.   蒸馏水,

5.   一次性试管

6.   吸水纸

 

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