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色氨酸羟化酶(Th)ELISA 试剂盒

简要描述:色氨酸羟化酶(Th)ELISA 试剂盒 Tryptophan hydroxylase Assay Kit!本公司长期经营代理试剂盒,价格实惠,质量保证,价格请咨询在线人员。

  • 产品型号:Th
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2018-07-04
  • 访  问  量:241

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色氨酸羟化酶(Th)ELISA 试剂盒

夹心法

夹心法常用于检测大分子抗原,一般的操作步骤为:

  1. 将具有专一性的抗体固著(coating)于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体

  2. 加入待测检体,检体中若含有待测的抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结

  3. 洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一的一次抗体,与待测抗原进行键结

  4. 洗去多余未键结一次抗体,加入带有酶的二次抗体,与一次抗体键结

  5. 洗去多余未键结二次抗体,加入酶底物使酵素呈色,以肉眼或仪器读取呈色结果

色氨酸羟化酶(Th)ELISA 试剂盒

用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化生产。当前应用较多的有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP应用广。

过氧化物酶广泛分布于植物中,辣根中含量高,从辣根中提取的称辣根过氧化物酶(HRP),是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白(含糖量18%),分子量约40 000,约由300个氨基酸组成,等电点为pH 3-9,催化反应的适pH值因供氢体不同而稍有差异,一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。酶蛋白和辅基的大吸收光谱分别为275nm和403nm。

酶的纯度以RZ表示:RZ=OD403/OD275

纯酶的RZ多在3.0以上,高为3.4。RZ在0.6以下的酶制品为粗酶,非酶蛋白约占 75%,不能用于标记。RZ在2.5以上者方可用于标记。HRP的作用底物为过氧化氢,催化反应时的供氢体有几种:(1)邻苯二胺(OPD),产物为橙色,可溶性,敏感性高,大吸收值在490nm,可用肉眼观察判别,容易被浓H2SO4终止反应,颜色可在数小时内不改变,是目前国内ELISA中常用的一种;(2)联大茴香胺(OD),产物为橘黄色,大吸收值在400nm,颜色较稳定;(3)5-氨基水杨酸(5-AS):产物为深棕色,大吸收值在449nm,部分溶解,敏感性较差;(4)邻联甲苯胺(OT)产物为蓝色,大吸收值在630nm,部分溶解,不稳定,不耐酸,但反应快,颜色明显。

工作原理

本试剂盒采用双位点夹心酶联免疫吸附法(ELISA),测定样品中的水平。向预先包被抗体的酶标孔中加入标准品、待测样本和HRP标记的抗体,经过温育和洗涤,去除未结合的组分,然后再加入底物AB,产生蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅与样品中的浓度呈正相关

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