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标本要求
1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
核转录因子(NF-kB)ELISA 试剂盒
酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay(简写ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。酶联免疫吸附测定(ELISA)为免疫学中的经典实验,本词条从定义、基本原理、分类方法、操作要点等方面对其进行了详细介绍。
核转录因子(NF-kB)ELISA 试剂盒
过氧化物酶广泛分布于植物中,辣根中含量高,从辣根中提取的称辣根过氧化物酶(HRP),是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白(含糖量18%),分子量约40 000,约由300个氨基酸组成,等电点为pH 3-9,催化反应的适pH值因供氢体不同而稍有差异,一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。酶蛋白和辅基的大吸收光谱分别为275nm和403nm。
酶的纯度以RZ表示:RZ=OD403/OD275
纯酶的RZ多在3.0以上,高为3.4。RZ在0.6以下的酶制品为粗酶,非酶蛋白约占 75%,不能用于标记。RZ在2.5以上者方可用于标记。HRP的作用底物为过氧化氢,催化反应时的供氢体有几种:(1)邻苯二胺(OPD),产物为橙色,可溶性,敏感性高,大吸收值在490nm,可用肉眼观察判别,容易被浓H2SO4终止反应,颜色可在数小时内不改变,是目前国内ELISA中常用的一种;(2)联大茴香胺(OD),产物为橘黄色,大吸收值在400nm,颜色较稳定;(3)5-氨基水杨酸(5-AS):产物为深棕色,大吸收值在449nm,部分溶解,敏感性较差;(4)邻联甲苯胺(OT)产物为蓝色,大吸收值在630nm,部分溶解,不稳定,不耐酸,但反应快,颜色明显。
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