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基质金属蛋白酶(MMP-9)ELISA 试剂盒

简要描述:基质金属蛋白酶(MMP-9)ELISA 试剂盒 matrix metalloproteinases-9kit!本公司长期经营代理试剂盒,价格实惠,质量保证,价格请咨询在线人员。

  • 产品型号:MMP-9
  • 厂商性质:经销商
  • 更新时间:2018-07-05
  • 访  问  量:220

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基质金属蛋白酶(MMP-9)ELISA 试剂盒

ELISA用血清来检测,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取血清。将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有就是质控品(这是严格的要求,它的范围必须在质控范围内)。经过一个小时的孵育,然后洗板,加底物,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。

基质金属蛋白酶(MMP-9)ELISA 试剂盒

竞争法

  1. 竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制,一般用于检测小分子抗原,其操作步骤为:

  2. 将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体

  3. 加入待测检体,使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结

  4. 加入带有酶的抗原,此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结,由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限,因此当检体中抗原的量越多,则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少,亦即,两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结,即所谓竞争法之由来。

  5. 洗去检体与带有酶的抗原,加入酶底物使酶呈色,当检体中抗原量越多,代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少,显色也就越浅。

    当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原,或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时,一般会考虑使用竞争法ELISA。

操作程序

1.   分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入标准品50μl;在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。轻轻晃动混匀,37℃温育60分钟。

2.   弃去液体,甩干,每孔加满稀释后洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。如此重复5次,拍干。

3.   每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

4.   取出酶标板,每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

5.   测定:以空白孔调零,在450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

6.   根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的,其实际浓度应该乘以总稀释倍数。

 

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